构建测序文库是整个高通量测序(NGS)过程中尤为关键的一步,测序文库的质量将直接影响后续测序及数据分析。通常,文库构建方案要求对片段化的DNA进行末端修复,并在其两端连上特定序列的接头,扩增以形成满足高通量平台测序要求的文库。高质量的接头有利于片段DNA与接头的连接,提高文库构建效率。
成品接头
百力格针对Illumina高通量测序平台开发了超低污染率的UDI接头(万分之五和百万分之一两种防污染工艺),接头定量准确且退火效率高。所有接头均经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证文库构建的稳定性和可重复性。
定制化接头
百力格可以根据客户需求定向研发和生产不同要求的接头序列,包括短接头、全长接头、不同污染率要求、适用于不同建库标准的专用接头等。
接头性能优势
1. 退火效率高:优化的退火buffer,退火程序及专用的退火仪器,专用的退火效率检测方法;
2. 连接效率高,建库产量高;
3. 污染率低:接头污染率在万分之五以内,短接头达到万分之一水平;
4. 拆分率高:优化合成工艺,降低接头oligo的合成错误率,达到了最好的数据拆分率;
退火效率
1. 针对NGS接头优化的退火buffer,既能保证高的退火效率,又能保证接头在退火buffer中能够稳定的储存
2. 针对NGS接头退火优化的退火程序及大批量退火专用的退火仪器
3. 建立专用的退火效率检测方法
百力格退火检测(成品接头)
1-2 为已退火接头 F-R 为退火引物
连接效率
连接效率检测方法 :
qPCR连接效率=接头引物qPCR计算出 nM / 标品引物qPCR计算出 nM
连接效率高于竞品
建库产量高于竞品
数据拆分
污染率
防污染工艺:
1. 百力格接头防污染工艺,污染率低于万分之五(96 UDI短接头,平均污染率万分之0.85)
2. 特殊污染源防控合成
引物合成碱基错误率
通过测序的方式检测合成illumina接头引物的碱基错误情况
拆分率
拆分率:97.92%
illumina 接头包lane检测拆分率(10nt,允许1错配)
降低合成错误率,提升拆分率