• 介绍

多重PCR（Multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR）技术是一种在单一PCR反应中同时扩增多个靶序列的核酸检测技术。这项技术自1988年首次提出以来，因其高效性、高通量和低成本的特点，在科学研究和疾病诊断等多个领域得到了广泛应用。
虽然在多重PCR中能够快速经济地对多个靶点进行检测，但同时也面临着一些挑战，如引物设计、反应条件优化、非特异性扩增和引物二聚体等问题。这就需要在设计引物时，对引物的特异性、长度、GC含量、退火温度等进行精心设计和优化，以确保每对引物都能均衡地扩增目标片段。
Multibaits 通过生成尽量多的引物序列，多种指标筛选后得到质量合格引物，后通过最新的二聚体理论和退火优化算法得到更好的引物组合。

• 流程概要

流程主要包括三个阶段：生成引物，筛选引物，所有引物组合。

• 产品特点

1.   专业的设计工具得到最优的多重引物设计；

2.   低碱基错误率工艺合成多重引物，确保高的扩增效率和低的非特异性扩增；

3.   引物自动化定量分装混合，定量准确、混合均一；

4.   扩增体系支持最多扩增7000重；

5.   针对极个别位点会出现难覆盖给出相应的策略进行解决，提高位点覆盖率。

• 多重PCR 反应技术路线：两轮扩增

第一轮 -- 对多个目标区域进行扩增，得到扩增子产物

第二轮 -- 扩增加上测序接头

• 针对个别位点难覆盖的策略

1.   免费设计新引物进行原有引物的替换和测试，解决引物扩增效果差、位点未覆盖的问题。

2.   某些重要位点经过反复多次优化后可能仍然无法被覆盖，将未覆盖位点的引物挑选出来单独扩增，之后合并。用于必须要检出的目标位点。

• 多重引物设计

• 设计报告

多重扩增子引物设计工具链接：

• 多重扩增实例：132重

1.　比对率：Clean data 比对到参考基因组上的数据占比；

2.　On_target：比对到目标区域的Read 数与比对到参考基因组上Read 数的比例；

3.　0.20*mean：目标区域内，测序深度达到平均测序深度的20% 区域占目标区域的比例。

• 整体解决方案

1.   人的多重扩增子测序可以设计、合成、扩增、测序验证；

2.   病原tNGS，客户提供病原参考序列，可以设计+合成，客户端测序验证。