核酸递送转染是分子生物学和细胞生物学研究的重要技术。外源性DNA、RNA、蛋白质通过与转染试剂的相互作用，可被转化为稳定复合物以被细胞摄入。这项技术被广泛应用于基因干扰、基因编辑、基因表达、核酸药物筛选以及基因治疗等现代基因研究领域。

一、转染试剂的分类

1.依据转染的稳定性和效率分类

稳定转染

外源基因（DNA/RNA）整合到宿主基因组上，能稳定遗传给后代。多用于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白之间的相互作用。

瞬时转染

外源基因（DNA/RNA）不整合到宿主基因组上，仅在细胞分裂周期内表达。主要用于启动子和其他调控原件的分析以及蛋白质的功能研究。

2.依据转染试剂自身性质分类

离子类试剂

包括钙磷法、肌动蛋白类试剂等

磷酸钙成分的转染试剂，主要原理：与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物，粘附到细胞膜表面，借助内吞作用进入细胞质。

肌动蛋白类转染试剂，主要原理：利用细胞内辅因子肌动蛋白与DNA形成复合物，使DNA进入细胞。 

聚合物类试剂

包括聚乙烯醇、聚合脂质体等

主要原理：带正电的聚合物与核酸上带负电的磷酸基团通过电荷相互作用，形成带正电的复合物，再与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，通过内吞作用进入细胞。

                                                     图1. 聚合物类核酸递送载体目录

脂质类试剂

包括伯胺脂质、双链脂质等

主要原理：带有负电荷的DNA和阳离子脂质通过静电作用结合，形成脂质-DNA的结构，再通过与细胞膜的融合或者内吞作用进入细胞。

                                                           图2. 常见转染技术原理

二、操作步骤

1.实验前准备好所需材料，包括细胞培养基、培养皿等。

2.接种细胞到培养皿或孔板中，控制细胞至适当浓度。

3.将所需核酸溶解到无菌介质中，混匀。

4.在核酸样品中加入转染试剂，轻轻混合后在室温下孵育一定时间。

5.将孵育后的核酸-转染试剂复合物添加到细胞中，轻轻混匀。

6.细胞培养一定时间后进行检测。

                                                  图3 转染细胞操作流程示意图

您在转染实验中是否经常遇到转染效率低、细胞死亡率高等问题呢？那么您需要注意以下5点，才能让实验不白做！

1.条件优化

正式实验前多做预实验，优化转染条件，包括：细胞密度、转染试剂用量、核酸浓度、试剂与核酸孵育时间等。

2.核酸质量

质粒纯度不够，含有细菌LPS或其他对细胞有害的物质，均会影响转染效率。

3.细胞污染

细胞污染会造成细胞死亡，转染效率低下；转染细胞用的核酸和转染试剂都要求无菌。

                             细胞污染造成细胞死亡（左图）；细胞无污染，细胞状态健康（右图）

4.细胞状态

细胞状态不好导致转染效率低下，一般进行转染时的细胞应处于对数生长期；转染时一般控制细胞汇合度60%~80%之间，细胞密度过低/过高也会导致转染效率低。

5.转染试剂毒性

转染试剂毒性大，易造成细胞死亡和转染效率低下。一般脂质体试剂毒性较大，非脂质转染试剂细胞毒性小。

                                          转染试剂毒性大，转染一定时间后细胞状态不佳甚至死亡（左图）；

                                          转染试剂毒性小，转染一定时间后细胞状态健康（右图）

三、新品推荐

百力格全新推出一款低毒性且高效转染siRNA和DNA质粒的BGP NAM11转染试剂，利用关键成分纳米级微正电聚合物与带负电荷的核酸分子结合，形成pH可控制的纳米级复合物，使其温和进入细胞，逐步释放核酸成分，完成基因递送转染过程。

产品特点

1.高效转染

无缝适配RNAi小核酸和DNA质粒细胞递送，细胞密度在70%~80%，根据细胞种类优化后转染效率可达到80%以上。

2.高兼容性，满足多种细胞转染

HEK-293，HEK-293T、Hep-G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Vero等。

3.性质温和

低细胞毒性，细胞存活率高，减少转染递送制剂对细胞及相关基因非特异影响。

4.应用广泛

核酸药物筛选（siRNA，miRNA, ASO）、细胞稳筛、病毒包装等基因工程领域。

5.使用方便

产品稳定，室温、 -80℃~4℃保存运输均对其功能影响不明显。

性能测试

1.转染效果更优

对不同质粒、不同细胞系如HEK-293、CHO K1、Hep G2、NIH/3T3、Hela、Vero等都有较好的转染效果，且效果明显优于竞品。

                    图4. 在24孔板使用BGP NAM11转染试剂1 μL，siRNA用量15 pmol，细胞转染48h后的荧光图片

BGP NAM11转染EGFP-质粒

                  图5. 在24孔板使用BGP NAM11转染试剂1 μL，EGFP质粒用量0.5 μg，细胞转染48h后的荧光图片

                  图6. 同等siRNA和转染试剂用量下（转染试剂1 μL，siRNA用量15 pmol），BGP NAM11与其他

                                                                品牌转染试剂的明场和荧光比对图片

BGP NAM11转染含GAPDH干扰片段的siRNA，使用WB测试其干扰表达量。BGP NAM11组表现出更好的干扰效果

                                                                                    图7.WB测试数据统计

2.细胞毒性低

细胞计数仪测试转染72h后细胞活率，BGP NAM11整体表现更低的细胞毒性

                                                                                     图8. 细胞活率测试数据统计

通过以上数据展示，百力格核酸纳米递送转染试剂BGP NAM11，利用温和纳米缓释技术，同等siRNA和转染试剂用量下，较其他品牌转染后荧光更强，缓释效应更强，转染效率提高30%，干扰效果提升20%，细胞毒性更低，细胞活率提高5~15%，兼容多种细胞转染需求，有效提高实验成功率，节约实验成本和您的宝贵时间。

四、产品信息

参考文献