Taqman探针法：

       在PCR扩增反应加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针（Taqman探针），该探针5’端标记一个荧光染料报告基团（Reporter, R），3’端标记一个淬灭荧光基团(Quencher, Q)。开始时，探针完整地结合在DNA任意一条单链上，报告基团（R）发射的荧光信号被淬灭基团（Q）吸收，检测不到荧光信号；PCR扩增时，Taq酶的核酸外切酶活性将探针酶切降解，使报告基团（R）和淬灭基团（Q）分离，从而发出荧光，切割下来的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，可以通过检测PCR反应体系中的荧光强度检测PCR产物的扩增量（如下图所示）。因此，探针的设计尤为关键。

超级淬灭探针（Super Quencher, SQ）

       为了有效降低本底荧光信号的干扰，提高检测灵敏度，攻克淬灭剂小分子合成技术难题，百力格自主研发超级淬灭探针（SQ）。除了在3’端标记有独特的淬灭基团，同时在序列中间增加一个淬灭基团（如下图所示），双重淬灭防护，防止荧光泄漏，确保更好的淬灭效果。

优点：

高灵敏度：最低检出下限至1 copy；

高性噪比：有效降低背景荧光信号；

多重qPCR检测：有效避免不同荧光通道窜道问题，减少假阳性。

明星搭配

qPCR应用

       同一序列不同淬灭基团修饰荧光背景强度比较

FAM-SQ1

       非洲猪瘟AsFV-p72基因检测，绿色为FAM-SQ1，红色为FAM-BHQ1。

VIC-SQ1

       猴痘质粒检测，（左）50,000以下本底是VIC-SQ1，200,000左右是VIC普通探针；（右）蓝色是VIC-SQ1，绿色是VIC普通探针。

★ROX-SQX★

       检测模板依次为10⁵，10⁴，10³，10²，10¹ copies/μl的质粒，（左）100,000以下本底的是ROX-SQX，400,000左右的是ROX普通探针；（右）蓝色是ROX-SQX，绿色是ROX普通探针。

Cy5-SQ2

       新冠2019-nCov O基因检测，蓝色为BF650-SQ2，红色为Cy5-BHQ2，BF650与Cy5为相同通道。

dPCR应用

       左侧为普通Taqman探针，右侧为超级淬灭SQ探针荧光信号检测结果。

       超级淬灭探针在FAM和Cy5通道，阴性信号均有显著降低；在HEX通道，虽然阴性信号没有影响，但阳性信号强度有所提升，使dPCR微滴信号信噪比（S/N）较普通Taqman探针均有显著提高。另外，三种超级淬灭探针荧光信号在dPCR系统中均无串道和信号衰减。